ELISA實(shí)驗(yàn)加樣可能碰到的問(wèn)題及解決方法
在ELISA實(shí)驗(yàn)中一般有3次加樣步驟，即加標(biāo)本，加酶結(jié)合物，加底物。凍結(jié)血清融解后，蛋白質(zhì)局部濃縮，分布不均，應(yīng)充分混勻宜輕緩，避免氣泡，可上下倒置混和，不要在混勻器上強(qiáng)烈振蕩。在加樣的過(guò)程中會(huì)碰到什么問(wèn)題呢?讓我們一起看一下實(shí)驗(yàn)過(guò)程中加樣可能碰到的問(wèn)題:
1、過(guò)長(zhǎng)(特別是室內(nèi)溫度較高時(shí));
2、手工操作中，加樣板過(guò)多造成加樣后放入孵箱前等待時(shí)間;
3、加完標(biāo)本再加酶試劑時(shí)酶濺出孔外。血清或血漿標(biāo)本分離不好即進(jìn)行加樣。
相應(yīng)解決辦法:
1、標(biāo)本為血清:將血液先自然存放1-2小時(shí)后，再用3000rmp離心15分鐘;標(biāo)本為血漿:必須使用含抗凝劑的血液標(biāo)本收集管,采血后必須立即顛倒采血管混合5-10次，放置一段時(shí)間后，3000rpm離心15分鐘; 若在幾天內(nèi)檢測(cè)，可放在2- -8C冰箱中，若要貯存，則置于-20C 的低溫冰箱內(nèi)。
2、加樣后及時(shí)放入孵箱。
3、加酶試劑后用吸水紙?jiān)诿笜?biāo)板表面輕拭吸干。
4、如果采用AI或其他全自動(dòng)加樣，選擇F AMN或其他后處理儀器加酶試劑。
5、標(biāo)本較多時(shí),請(qǐng)分批操作。
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